松材線蟲檢測儀是一種用于檢測松材線蟲（Bursaphelenchus xylophilus）存在的設備。松材線蟲是一種具有破壞性的植物寄生線蟲，可以引起松樹（尤其是松科樹種）的嚴重病害，導致松樹枯萎和死亡。早期的檢測和監測對于及早采取防控措施和減輕疫情的影響至關重要。

檢測步驟：
松材線蟲檢測儀通?；诜肿由飳W的技術主要包括以下步驟：

樣品提?。簭囊伤聘腥舅蓸浠蚰静闹刑崛悠?。樣品可以是樹干、樹皮、樹根、鋸木或其他可能存在線蟲的植物組織。
核酸提?。菏褂眠m當的方法從樣品中提取松材線蟲的DNA。這是為了獲取線蟲的遺傳信息，以便進行后續的分子檢測。
核酸擴增：使用實時定量聚合酶鏈式反應（qPCR）技術，特異性地擴增松材線蟲DNA，從而確定樣品中是否存在松材線蟲，并定量檢測目標DNA序列的起始數量。

儀器基本結構：
     松材線蟲檢測儀是實時檢測反應的儀器，主要由基因擴增熱循環系統、熒光實時檢測系統、微電路控制系統、計算機及應用軟件組成。其中兩個核心功能模塊：熱循環系統和熒光實時檢測系統。其中基因擴增熱循環系統工作原理與傳統基因擴增儀工作原理基本相同，采用半導體加熱制冷工作方式完成熱循環過程。熒光檢測系統主要有由熒光激發部件、光信號傳輸部件、熒光檢測部件、控制系統組成。

儀器主要參數：

1.樣本容量:16孔；

2.適用耗材：0.2ml單管透明管、8聯管；

3.檢測通道:≥2；

4.適用熒光素：

   1）通道1：FAM、 SYBR Green I、SYTO 9、EvaGreen、LC Green等；

   2）通道2：HEX, VIC, TET, JOE等；  

   3）無需ROX及其他通道校正。

★5.反應體系：5-100μl，支持超小試劑反應體系；

6.光源：高亮長壽命免維護LED光源；

★7.熒光檢測方式：新型光電檢測器，底部檢測專利技術（非頂部、非側壁），2個熒光通道同時檢測，無熒光邊緣效應；

★8.檢測時長：約5秒內完成2個熒光通道16個孔位的全部檢測；

9.模塊控溫范圍：4～99℃；

10.控溫技術：進口半導體制冷片加熱制冷技術；

11.溫度均勻性：≤±0.1℃；

★12.溫度速率：

    1）**升溫速度：≥ 7℃/S

2）**降溫速度：≥ 6℃/s； 

13.梯度溫度：

1）寬度：0

2）溫度數：0

★14. 操控方式：

      1）內置PC:儀器通過通訊口與內置7寸觸摸屏 連接后，利用電腦上的應用軟件實現實驗設置、運行監控、數據分析等操作；

15.熱蓋自動壓力調節：樣本管放入后，自動熱蓋壓力自適應。

★16．軟件分析功能：定性分析、絕對定量分析、相對定量分析、終點熒光分析、熔解曲線分析等；

★17.報告功能：可導出PDF等格式，可數據上傳服務器（選配）；

★18.報告自定義功能：預存實驗模板，可選擇打印機（選配），直接打印結果；

★19.實驗數據在儀器內實時保存；

★20.內置多個用戶模板方便操作。

附【使用指南】

1. 樣品處理與核酸提取

1.1 樣品處理

1.1.1 蟲懸液樣本：已經分離出的蟲懸液樣本可直接編號待檢。

根據待檢樣品數量， 取相應數量的 1.5 mL 離心管分別加入混勻后的蟲懸液 1 mL，1,0000  rpm 離心  1分鐘，棄去上清。然后加入 100 μL 核酸快提液，渦旋（2-3秒）混勻后，進行下一步實驗。

1.1.2 疫木樣本：用電鉆鉆取疫木木屑，編號待檢。

根據待檢樣品數量，取相應數量的 1.5  mL 離心管分別加入鉆出的疫木木屑 100mg左右（至離心管0.5刻度度線位置） ，同時加入 1mL 核酸快提液，充分渦旋（2-3秒）混勻，10,000  rpm 離心 30秒， 進行下一步實驗。

1.2 核酸的提取

將上一步處理好的樣品，95℃ 溫育5 分鐘，渦旋（2-3秒）瞬時離心（4-5秒）后，所得溶液即為待檢核酸。如在兩小時檢測可以把待檢核酸存放于 4 ℃，否則請于 -20℃ 下儲存。

2. 核酸擴增

2.1 打開松材線蟲檢測用熒光定量PCR儀，啟動應用程序待用，取出PCR反應液管，PCR反應復溶液和陰、陽性對照渦旋（2-3秒）混勻，瞬時離心（4-5秒）待用。

2.2 剪取 n 個凍干反應管（n=樣品數+1 陽性對照+1 陰性對照），在每個反應管中加入 20 μL PCR反應復溶液，然后按順序分別加入陰性對照 5 μL，待檢模板 5 μL，陽性對照 5 μL，每管所得反應總體積為 25 μL，輕彈凍干反應管管底，以保證凍干顆粒完全復溶，瞬時離心（4-5秒）。

2.3 將準備好的PCR反應管放入儀器內，設置所需要的的孔位，使用儀器以下程序，點擊實驗開始按鈕，開始。

3. 結果判讀

根據分析后的圖像調整基線和閾值。閾值設定原則以閾值線超過正常陰性對照品的**點及線性**為準，在閾值以上的熒光曲線應當是具有明顯的S型曲線。陽性對照Ct值應小于30，陰性對照Ct值無數據，否則該次實驗視為無效，應檢查儀器、試劑、擴增條件等方面的誤差。

① 檢測樣本Ct值≤ 36.0者判為陽性；

② 檢測樣本Ct值﹥36.0者或無Ct值者判為陰性。

若陰陽性對照反應管結果與上述情況不符，則本次檢測結果無效，應重新檢測或與產品技術支持聯系。